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血浆中普瑞巴林和替米沙坦含量的分析(CommaSep® PPT)

2019-08-02 09:54:00
逗点生物
363
最后编辑:逗点生物 于 2019-08-02 14:28:13

一、设备和材料

1)CommaSep® PPT 96 孔蛋白沉淀板
2)CommaVac® CommaMix 多功能混匀仪
3)CommaVac® 96 孔氮吹仪
4)CommaVac® 96 孔正压提取装置

二、仪器条件

仪器:FH-6000MD UPLC-MS/MS
色谱柱:Hypersil Gol.D aQ (2.1 mm×100 mm, 1.9 μm)
柱温:30 ℃
样品温度:10 ℃
进样量:2 μL
流动相:A:Buffer A B:Buffer B
洗脱方式:梯度洗脱
表 1 流动相梯度洗脱条件

电喷雾电压:3500 V
鞘气压力:35 arb
辅气压力:2 arb
离子传输管:350 ℃
辅气温度:340 ℃
采集方式:多反应监测
表 2 化合物的保留时间及离子对参数

重庆彩票网注:* 表示定量离子对

三、实验步骤

1、样品提取
将 25 μL 血浆和 25 μL 50% 甲醇水溶液混合均匀。
2、样品净化
1) 向 96 孔 PPT 板中加入 250 μL 甲醇,再将上述混好的血浆加到 96 孔 PPT 板中,在多功能混匀仪上1000 r/min 涡旋 4 min 混匀。
2) 使用正压装置,调节压力,将 PPT 板上液体压入到96 孔收集板中,3 分钟后停止正压装置。
3)将收集板置于 96 孔氮吹仪上,40 ℃氮吹浓缩至近干。
4) 向收集板中各孔中加入 500 μL 0.1% 甲酸水溶液,涡旋混匀供上机测试。

四、实验结果

使用空白血浆样品配制 7 个不同浓度的校准标曲点,普瑞巴林和替米沙坦的浓度分别为:5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL。所得样品采用上述前处理方法净化并上机检测,基质标准曲线见表 3。另取血浆样品添加不同浓度目标物进行加标回收实验,测定结果见表 4。
表 3 基质标准曲线

表4 血浆中普瑞巴林和替米沙坦加标回收实验结果(n=3)

由以上数据表明:CommaSep® PPT 96 孔蛋白沉淀过滤板对血浆样本中普瑞巴林和替米沙坦的检测平均回收率在 60-110% 之间,RSD 小于 10%,满足测试要求

五、订货信息


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